Atividade antipalúdica da plumbagina in vitro e em modelos animais. Antecedentes Plumbagin é o principal componente ativo em várias plantas, incluindo Plumbago indica Linn. (raiz). Este composto mostrou exibir um amplo espectro de atividades biológicas e farmacológicas. O presente estudo teve como objetivo avaliar a atividade antimalárgica in vitro e in vivo da plumbagina, incluindo sua toxicidade aguda e subaguda em camundongos. Atividade antipalúdica in vitro de plumbagina contra K1 e 3D7 Os clones de Plasmodium falciparum foram avaliados utilizando o ensaio baseado em SYBR Green I. A atividade antipalúdica in vivo foi investigada no modelo de mouse infectado com Plasmodium berghei (teste supressor de 4 dias). Plumbagin exibiu promissora atividade antipalúdica com IC 50 in vitro (concentração que inibe o crescimento do parasita em 50) contra os clones de P. falciparum resistentes à cloroquina 3D7 e sensíveis à cloroquina de 580 (270640) e 370 (270490) nM, respectivamente. Os testes de toxicidade indicaram toxicidade relativamente baixa nos níveis de dose até 100 (dose oral única) e 25 (dose diária durante 14 dias) de peso corporal para toxicidade aguda e subaguda, respectivamente. A cloroquina apresentou a atividade antipalúdica mais potente em camundongos infectados com a cepa ANKA de P. berghei em relação à sua atividade na redução da parasitemia no dia 4 e ao prolongamento do tempo de sobrevivência. Conclusões Plumbagin na dose de 25 mg kg de peso corporal administrado durante 4 dias foi seguro e produziu fraca atividade antipalúdica. A derivação química do composto original ou preparação de formulação modificada é necessária para melhorar a sua biodisponibilidade sistêmica. Plumbagin Antimalarial Plasmodium falciparum Plasmodium berghei Antecedentes A malária é generalizada nas regiões tropicais e subtropicais. Ao longo da história da humanidade, esta doença altamente infecciosa tem sido uma das principais causas da doença humana e da morte. A quimioterapia com fármacos antipalúdicos efetivos continua a ser o principal suporte para o controle da malária na ausência de um tratamento de vacina adequado. Plasmodium falciparum é a espécie de malária infecciosa mais virulenta e disseminada em países tropicais e subtropicais devido à resistência do parasita à maioria dos medicamentos antimaláricos disponíveis 1. Em uma corrida para combater a crescente resistência a múltiplos medicamentos P. falciparum. A terapia de combinação baseada em artemisinina (ACT) foi recomendada pela Organização Mundial de Saúde (OMS) como o tratamento de primeira linha para a malária de P. falciparum com complicações múltiplas e complicadas sem complicações em todas as áreas endêmicas de malária do mundo. À medida que a resistência a medicamentos antimaláricos compromete o tratamento efetivo da doença, existe uma necessidade urgente de pesquisa contínua de descoberta de medicamentos que providenciará agentes antipalúdicos efetivos, seguros e acessíveis. Os produtos naturais, incluindo plantas medicinais, podem oferecer oportunidades de tratamento alternativas relativamente baratas para pacientes com malária 2. 3. Dois medicamentos antimaláricos atualmente amplamente utilizados para o controle da malária originalmente vieram de plantas medicinais indígenas, a quinina é isolada da casca peruana de Cinchonas e as artemisininas são obtidas da planta chinesa Artemisia annua Linn. A plumbagina (5-hidroxi-2-metil-1,4-naftoquinona) é um produto natural isolado de várias plantas nas famílias de Plumbaginaceae, Droseraceae, Ancestrocladaceae e Dioncophyllaceae. É uma naftoquinona que ocorre nas raízes das plantas como uma forma combinada incolor que pode ser processada à plumbagina por tratamento ácido 4. Este composto mostrou exibir um amplo espectro de atividades biológicas e farmacológicas, como atividades contra a malária, leishmania e parasitas de tripanosoma, bem como contra vírus, cânceres e insetos 5. O extrato etanólico de Plumbago zeylanica foi reportado para exibir atividade antipalúdica in vitro contra o clone sensível à cloroquina de P. falciparum (3D7) com IC50 (concentração que inibe o crescimento do parasita em 50) de 17 gml 6. A actividade contra o succinato de enzimas de P. falciparum desidrogenanse (SDH) incluindo o crescimento de parasitas demonstrou ser inibida para 50 por plumbagina a concentrações inibitórias de 5 e 0,27 mM, respectivamente 7. Recentemente, nosso grupo demonstrou atividade antipalúdica promissora do extrato etanólico de Plumbago indica Linn. 8. O objetivo do presente estudo foi avaliar ainda mais a atividade antimalárica in vitro e in vivo de sua plumbagina constitutiva ativa. Além disso, foram realizados testes de toxicidade aguda e subaguda para confirmar sua segurança e tolerabilidade e para obter uma dose ideal utilizada para a avaliação antimalárica in vivo. Plumbagin (pureza 98.2) foi obtido da Apin chemicals Co. Ltd. (Oxford, Reino Unido). O Tween-80 e o difosfato de cloroquina foram obtidos de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, EUA). O pó de RPMI 1640 contendo L-glutamina, estreptomicinpencililina e HEPES foi obtido da Gibco BRL Life Technologies (Grand Island, NY, EUA). Gentamicina foi obtida da Invitrogen Life Technologies Inc. (Carlsbad, CA, EUA). Experimento in vitro Cultivo in vitro de parasitas de malária Os estágios sanguíneos dos clones de laboratório resistentes à cloroquina (K1) e sensíveis à cloroquina (3D7) P. falciparum foram cultivados in vitro de acordo com o método de Trager e Jensens 9. Todas as etapas de cultura foram realizadas usando técnica asséptica no gabinete de segurança NuAire de fluxo laminar classe II. Todos os produtos de vidro foram autoclavados a 121C (15 atmosferas) durante pelo menos 15 min. O parasita da malária foi mantido em cultura contínua com glóbulos vermelhos embalados humanos (grupo sanguíneo O) em meio RPMI 1640 suplementado com 10 soros AB humanos, ácido N-2-hidroxietilpiperazina-N-2-etanossulfónico 25 mM (HEPES), sódio 25 mM Bicarbonato e sulfato de gentamicina (60 gml, pH 7,2). A cultura foi incubada a 37 ° C numa atmosfera que consistiu em 90 N 2. 5 O 2. E 5. A cultura do parasita foi sincronizada com o estágio do anel por tratamento com 5 (wv) D-sorbitol 10. Avaliação da atividade antipalúdica in vitro da Plumbagin A atividade antipalúdica da plumbagina foi investigada usando o ensaio SYBR Green I 10. 11. Foi utilizado parasita de estágio de anel altamente síncrono em cada ensaio. Foi adicionada uma alíquota de inóculo parasitário (50 l) com 2 parasitemias e 1 hematócrito em cada poço da placa de microtitulação. O Plumbagin (dissolvido em DMSO e diluído com RPMI 1640 até a concentração final de 1) foi adicionado à cultura da malária a oito concentrações finais de 210, 420, 840, 1680, 3360, 6720, 13440 e 26880 nM. Cloroquina (3,89-498,15 nM) e artesunato (0,39-50,0 nM) foram utilizados como fármacos antimaláricos padrão. O experimento foi repetido três vezes (triplicou cada um). O valor IC50 (concentração de fármaco que inibe o crescimento do parasita em 50) foi utilizado como indicador da atividade antipalúdica e foi determinado a partir de uma curva log-doseresponse plotada usando a versão 1.1 de Calcusyn (BioSoft, Cambridge, Reino Unido). Experimentos in vivo ratos ICR (Imprinting Control Region) (57 semanas de idade, ponderando 2040 g) de ambos os sexos foram utilizados no estudo. Todos foram obtidos do National Laboratory Animal Center, Tailândia. Os experimentos com animais foram realizados de acordo com a Diretriz da OECD para produtos químicos 12. Os animais foram alojados em condições padrão e alimentados com uma dieta de estoque e água e labitum. A aprovação do protocolo de estudo foi obtida no Comitê de Ética para Pesquisa Animal, Thammasat University, Tailândia. Testes de toxicidade O plumbagin foi ponderado e ressuspenso com 20 Tween-80 para obter as concentrações desejadas. Os ratos ICR estavam em jejum 2 h antes de se alimentar com uma única dose oral de plumbagina. Os animais foram divididos em oito grupos de seis (3 homens e 3 mulheres para cada grupo). Para o teste de toxicidade aguda, os ratos em cada grupo foram alimentados com plumbagina em uma única dose oral de 500, 200 e 100 mg kg de grupo de controle do peso corporal recebeu uma dose oral única de 20 Tween-80 (1 ml). Para o teste de toxicidade subaguda, os ratos em cada grupo foram alimentados com plumbagina em uma dose oral diária de 100, 50 e 25 mg kg de peso corporal durante 14 dias, o grupo controle recebeu uma dose oral diária de 1 ml de 20 Tween-80 durante 14 dias 13 . 14. O comportamento geral de cada rato foi observado continuamente durante 1 h após cada dose, intermitentemente a cada 4 h, e depois disso durante um período de 24 h 15. Os animais foram observados por até 14 dias para o teste de toxicidade aguda e 28 dias para o teste de toxicidade subaguda para qualquer sinal de toxicidade (mudança comportamental relacionada aos sistemas nervoso central, cardiovascular e gastrointestinal, bem como testes completos de contagem de sangue, fígado e rim ), Mudança de peso corporal e consumo de água e alimentos. No final do período de observação, todos os animais foram sacrificados sob anestesia e órgãos vitais (coração, pulmão, fígado, baço e rim) foram removidos de todos os animais para exame histopatológico grosseiro. Avaliação da atividade antimalárica da plumbagina no modelo de mouse infectado com Plasmodium berghei (teste supressor de 4 dias) A atividade antipalúdica in vivo da plumbagina foi avaliada usando um teste supressor de 4 dias no modelo de mouse infectado com P. berghei 16. A estirpe de P. berghei (ANKA) utilizada no experimento foi obtida do Centro Nacional de Engenharia Genética e Biotecnologia (BIOTEC), Tailândia. O parasita foi mantido pela passagem em sangue serial em camundongos, e o estágio de sangue armazenado em -196C até o uso. Os ratos ICR foram divididos em cinco grupos (3 machos e 3 fêmeas para cada grupo). Os murganhos doadores foram infectados com 200 l de inoculo de parasitas de P. berghei. O sangue parasitado de cada rato doador foi coletado da veia da cauda e diluído com cloreto de sódio 0,9. Os ratinhos foram infectados com suspensão salina de 1 10 7 eritrócitos parasitados (0,2 ml) por injeção intraperitoneal (Dia 0). Quatro horas após a infecção, os animais foram tratados com plumbagina em doses diárias orais de 1, 10 ou 25 mg de peso corporal de plumbagina durante quatro dias consecutivos (grupo de teste 1, 2 e 3, respectivamente). Grupos de controle positivos e negativos foram alimentados com cloroquina antimalárica em doses diárias orais de 10 mgkg de peso corporal de plumbagina e 20 Tween-80, respectivamente. No dia 4 (96 horas após a infecção), a parasitemia do mouse individual foi determinada sob microscópio de luz pelo exame de esfregaços de sangue fino manchados com giemsa preparados a partir de sangue de cauda de rato 17. A parasitemia média em cada grupo de ratos foi utilizada para calcular a supressão de cada dose utilizando a fórmula: Supressão Parasitemia de controle negativo - Parasitêmia de teste Parasitêmia de controle negativo 100 A atividade antipalúdica da plumbagina foi determinada a partir da proporção de porcentagem de redução de parasita Em grupos de controle tratados e negativos 18. Os resultados são expressos como valores médios (intervalo). A comparação da diferença em variáveis quantitativas entre mais de dois e dois grupos foi realizada utilizando os testes de Kruskal Wallis e MannWhitney U (SPSS versão 16.0, SPSS Inc. CO, EUA). O nível de significância estatística foi estabelecido em lt 0.05 para todos os testes. Avaliação das atividades antipalúdicas in vitro de Plumbagin Os valores medianos de IC50 para a atividade antimalárica de plumbagina contra os clones de P. falciparum sensíveis a cloroquina 3D7 sensíveis à cloroquina e a K1 cloquina foram de 580 e 370 nM, respectivamente. Os valores correspondentes de IC50 para cloroquina e artesunato foram 10,5 vs 128,7 e 2,1 vs 1,91 nM, respectivamente (Tabela 1). Atividade antipalúdica in vitro de plumbagina, cloroquina e artesunato Os dados são apresentados como valores médios (intervalo) de IC50 (nM). Testes de toxicidade A toxicidade da plumbagina quando administrada como uma dose oral única (toxicidade aguda) e doses diárias de 14 dias (toxicidade subaguda) em camundongos foi investigada para definir a dose ideal de plumbagina a ser utilizada para avaliação da atividade antimalárica in vivo No modelo do mouse de malária. Os resultados indicaram praticamente nenhuma toxicidade da plumbagina com uma dose oral única máxima de 100 mg kg de peso corporal (toxicidade aguda). Todos os ratinhos sobreviveram seguindo uma única dose oral de 100 mg kg de peso corporal de plumbagina e 20 Tween-80 (controle) (Tabela 2). Não houve sinal de toxicidade nem alteração significativa no consumo de água e alimento e nos pesos corporais dos camundongos em ambos os grupos durante o período de observação de 14 dias (Figura 1). No entanto, observaram-se sinais e sintomas tóxicos, incluindo ansiedade e agitação, em 66 e 26 de camundongos após as doses de 500 e 200 mg kg de peso corporal, respectivamente, todos morreram em 24 horas. O exame grosseiro dos órgãos vitais, isto é, coração, pulmão, fígado, baço e rim nos níveis tratados (todos os níveis de dose) e controle foram semelhantes tanto no tamanho como na morfologia celular. Número de ratinhos ICR sobreviventes após uma dose única (toxicidade aguda) e administração oral múltipla (toxicidade subaguda) de plumbagina Peso corporal médio (g) de camundongos machos e fêmeas (n 6 para cada grupo) durante os primeiros 14 dias na administração de um Dose oral única de 100 mg kg de peso corporal da plumbagina e após Tween-80 (controle) no teste de toxicidade aguda. Para o teste de toxicidade subaguda, todos os camundongos sobreviveram após doses orais diárias de 25 mg kg de peso corporal de plumbagina e 20 Tween-80 (controle) durante 14 dias (Tabela 3). Não houve anormalidade no comportamento, sinal de toxicidade, nem alteração significativa no consumo de água e alimentos e nos pesos corporais durante o período de observação de 14 dias (Figura 2). No entanto, observaram-se sinais e sintomas tóxicos, incluindo ansiedade e agitação, em todos os camundongos após as doses de 100 e 50 mg de peso corporal de plumbagina (por 14 dias). Os ratos que receberam 100 mg kg de peso corporal da plumbagina morreram dentro de 48 dias, enquanto aqueles que receberam dose de 50 mg kg de peso corporal morreram dentro de 811 dias. O exame grosseiro de órgãos vitais, isto é, coração, pulmão, fígado, baço e rim nos grupos tratados e controle foram semelhantes em tamanho e morfologia celular. Atividade antipalúdica da plumbagina em comparação com a cloroquina e controle negativo (tratado com 20 Tween-80) contra a cepa ANKA de P. berghei em ratos (teste supressor de 4 dias) Os dados são apresentados como valores médios (intervalo) (6 camundongos para cada grupo) de Densidade parasitária, supressão e tempo de sobrevivência. A Significativamente inferior aos grupos tratados com 10 e 25 mg kg de peso corporal da plumbagina e 10 mg kg de peso corporal da cloroquina (p lt 0,05). B Significativamente superior ao controle negativo e os grupos tratados com 1, 10 e 25 mgkg de peso corporal de plumbagina (p lt 0,05). C Significativamente maior do que o controle negativo e os grupos tratados com 1, 10 e 25 mggg de peso corporal de plumbagina (p lt 0,05). D Significativamente maior do que os grupos tratados com 1, 10 e 25 mgkg de peso corporal de plumbagina e 10 mg kg de peso corporal de cloroquina (p lt 0,05). Peso corporal médio (g) de camundongos machos e fêmeas (n 6 para cada grupo) durante os 28 dias após a administração de doses orais diárias de 25 mg kg de peso corporal de plumbagina e Tween-80 (controle) no teste de toxicidade subaguda. Avaliação da atividade antipalúdica da plumbagina no modelo de murganho ininfectado com Plasmodium berghei (teste supressor de 4 dias) Os resultados do teste antitimalárico supressor de 4 dias da plumbagina e da cloroquina em camundongos infectados com a cepa ANKA de P. berghei estão resumidos na Tabela 3. Mediana ( Intervalo de densidade do parasita no dia 4 do grupo de controle negativo (20 Tween-80), os ratos tratados com 1, 10 e 25 mg kg de peso corporal da plumbagina e 10 mg kg de peso corporal de cloroquina durante 14 dias foram 37,8 (46,9-41,8) , 35,6 (31,7-39,6), 35,05 (31,2-38,8), 22,3 (19,2-25,7) e 0 (00), respectivamente. A densidade de parasita no dia 4 no grupo controle tratado com Tween-80 foi maior do que os grupos tratados com cloroquina e 25 mggg de peso corporal de plumbagina. A cloroquina apresentou a atividade antipalúdica mais potente em relação à sua atividade na redução da parasitemia no dia 4 e prolongamento do tempo de sobrevivência. A densidade do parasita () no dia 4 após o tratamento com cloroquina (0) foi significativamente inferior a 20 Tween 80 (controle negativo) e plumbagina em todos os níveis de dose (p lt 0,05). Além disso, a supressão de parasitas () de camundongos tratados com cloroquina (100) foi significativamente maior do que o grupo de controle negativo (0) e os grupos tratados com 1 (5,5), 10 (7,3) e 25 (41) mg de plumbagina (p Lt 0.01). O tempo de sobrevivência no grupo tratado com cloroquina também foi significativamente maior do que o controle negativo e os grupos tratados com plumbagina em todos os níveis de dose (p lt 0,01). Discussão O Plumbagin, uma naftoquinona de ocorrência natural amplamente distribuída na família Plumbaginaceae, tem um grande espectro de propriedades farmacológicas. O extrato etanólico bruto de Plumbago indica Linn. (Raiz) mostrou possuir atividade antipalúdica boa a moderada (atividade antipalúdica classe III) em nosso rastreio in vitro anterior 8. Entre as 32 plantas investigadas, Plumbago indica Linn. Mostrou a atividade mais promissora contra os clones K1 cloroquina (IC 50 3 gml) e 3D7 cloquina-sensíveis (IC 50 6,2 gml), com maior seletividade (SI 44,7 e 21,6, respectivamente). Sua potência antimalárica contra o clone de K1 P. falciparum foi de cerca de 2,2 de artesunato. No presente estudo, a atividade antipalúdica promissora de sua plumbagina constitutiva ativa foi inicialmente demonstrada no ensaio in vitro com valores médios de IC50 contra clones de P. falciparum sensíveis a cloroquina 3D7 e cloroquina de 580 e 370 nM, respectivamente. Observou-se para uma atividade relativamente maior de plumbagina contra P. falciparum resistente à cloroquina (classe I: atividade muito boa) em comparação com o clone 19 de P. falciparum (classe II: bom) sensível à cloroquina. A diferença na atividade antipalúdica entre os dois clones pode ser devida à diferença nos mecanismos de transporte de drogas, particularmente aqueles que envolvem o transportador de resistência à cloroquina de Plasmodium falciparum (pfcrt). Os loci cromossômicos parasitas associados a estes fenótipos químicos diferenciais devem ser investigados para esclarecer este problema 20. Esta atividade, no entanto, deve ser vantajosa para o tratamento de pacientes em áreas onde P. falciparum ainda é sensível à cloroquina. A atividade antitimalárica prometedora foi observada na ausência de toxicidade significativa, tanto no teste de toxicidade aguda e subaguda com dose de até 100 mg kg de peso corporal e 25 mg kg de peso corporal durante 14 dias, respectivamente. Com base nos resultados do teste antipalúdico in vivo, a plumbagina na dose de 25 mg kg de peso corporal administrada durante 4 dias apresentou atividade antimalárdica moderada a fraca quanto à sua atividade inibitória na redução da parasitemia e prolongamento do tempo de sobrevivência. O composto em doses diárias de 10 mg kg de peso corporal durante 4 dias mostrou apenas atividade fraca, enquanto nas doses diárias de 1 mg kg de peso corporal não houve atividade significativa 19. A droga antimalárica com cloroquina apresentou a atividade antipalúdica mais potente com 100 supressões de parasitemia no dia 4 (0 densidade parasitária) e um prolongamento significativo do tempo de sobrevivência (gt 15 dias). Este resultado da atividade antipalúdica in vivo da plumbagina foi, contudo, inconsistente com o observado in vitro, mostrando que o composto era de atividade antipalúdica boa a moderada. O plumbagin é pouco solúvel em água, o que resulta em fraca absorção através da mucosa gastrointestinal e, portanto, baixa biodisponibilidade sistêmica 21. Em um estudo anterior, os camundongos tratados com formulação lipossomal de plumbagina demonstraram atingir um maior nível de plasma e tecido e área sob a curva concentração-tempo (AUC) em comparação com aqueles tratados com a plumbagina solúvel em água. Além disso, foi encontrada alta concentração no fígado e baço de camundongos 22. O estudo de farmacocinética in vivo também demonstrou que a plumbagina administrada por via oral produziu apenas 39 biodisponibilidade sistêmica devido às suas propriedades biofarmacêuticas limitadas, como alta lipofilicidade (log P 3.04) e insolubilidade em água 23. Conclusões Plumbagin na dose de 25 mg kg de peso corporal administrado durante 4 dias foi seguro e produziu fraca atividade antipalúdica. A derivação química do composto original ou preparação de formulação modificada é necessária para melhorar a sua biodisponibilidade sistêmica. Declarações Agradecimentos O estudo foi apoiado pela Comissão sobre Educação Superior (RG e NRU Projects), Ministério da Educação da Tailândia e o Royal Golden Jubilee Program do Fundo de Pesquisa da Tailândia (RGJ-TRF). Interesses concorrentes Os autores declaram que não têm interesses concorrentes. Contribuições dos autores WS realizou todos os experimentos in vivo e redigiu o manuscrito. O TP realizou os testes de toxicidade. WC contribuiu para as experiências in vitro. VV e KJ contribuíram para o desenho do estudo. KN contribuiu para a revisão do manuscrito. Todos os autores leram e aprovaram a versão final do manuscrito. Autores Afiliações Chulabhorn International College of Medicine, Universidade de Thammasat (Campus Rangsit) Departamento de Desenvolvimento de Produto Clínico, Instituto Nagasaki de Medicina Tropical Referências Na-Bangchang K: Farmacodinâmica da quimioterapia antimalárica. Expert Rev Clin Pharmacol. 2009, 2: 491-515. 10.1586ecp.09.27. Ver artigo PubMed Google Scholar Robert A, Benoit-Vical F, Dechy-Cabaret O, Meunier B: De fármacos antimaláricos clássicos a novos compostos com base no mecanismo de ação da artemisinina. Pure Appl Chem. 2001, 73: 1173-1188. 10.1351pac200173071173. Ver artigo Google Scholar Muthaura C, Keriko J, Derese S, Yenesew A, Rukunga G: Investigação de algumas plantas medicinais tradicionalmente utilizadas para o tratamento da malária no Quênia como fontes potenciais de medicamentos antimaláricos. Exp Parasitol. 2011, 127: 609-626. 10.1016j. exppara.2010.11.004. Ver artigo PubMed Google Scholar Sandur SK, Ichikawa H, Sethi G, Ahn KS, Aggarwal BB: Plumbagin (5-hidroxi-2-metil-1,4-naftoquinona) suprime a ativação de NF-kappaB e os produtos de genes regulados por NF-kappaB através de Modulação da ativação da p65 e da IkappaBalpha quinase, levando a potenciação da apoptose induzida por citocinas e agentes quimioterapêuticos. J Biol Chem. 2006, 281: 17023-17033. 10.1074jbc. M601595200. Ver artigo PubMed Google Scholar Paiva SR, Silva Marques S, Figueiredo MR, Auxiliadora M: Plumbaginales: abordagem farmacológica. Brasil J Forest Environ. 2003, 10: 98-105. Google Scholar Simonsen HT, Nordskjold JB, Smitt UW, Nyman U, Palpu P, Joshi P, Varughese G: rastreio in vitro de plantas medicinais indianas para atividade antiplasmodial. J Ethnopharmacol. 2001, 74: 195-204. 10.1016S0378-8741 (00) 00369-X. Ver artigo PubMed Google Scholar Suraveratum N, Krungkrai SR, Leangaramgul P, Prapunwattana P, Krungkrai J: Purificação e caracterização de succinato desidrogenase de Plasmodium falciparum. Mol Biochem Parasitol. 2000, 105: 215-222. 10.1016S0166-6851 (99) 00180-2. Ver artigo PubMed Google Scholar Thiengsusuk A, Chaijaroenkul W, Na-Bangchang K: Atividades antimaláricas de plantas medicinais e formulações de ervas utilizadas na medicina tradicional tailandesa. Parasitol Res. 2013, 112: 1475-1481. 10.1007s00436-013-3294-6. Ver artigo PubMed Google Scholar Trager W, Jensen J: parasitas da malária humana em cultura contínua. Ciência. 1976, 193: 673-675. 10.1126science.781840. Ver artigo PubMed Google Scholar Lambros C, Vanderberg JP: Sincronização de estádios eritrocíticos de Plasmodium falciparum em cultura. J Parasitol. 1979, 65: 418-420. 10.23073280287. Ver artigo PubMed Google Scholar Bennett TN, Paguio M, Gligorijevic B, Seudieu C, Kosar AD, Davidson E, Roepe PD: Quantificação celular, rápida e barata, baseada em células, da eficácia da droga antimalárica. Agentes antimicrobianos Chemother. 2004, 48: 1807-1810. 10.1128AAC.48.5.1807-1810.2004. Ver artigo PubMed PubMed Central Google Scholar Smilkstein M, Sriwilaijaroen N, Kelly JX, Wilairat P, Riscoe M: técnica baseada em fluorescência simples e barata para o rastreio de medicamentos antimaláricos de alto rendimento. Agentes antimicrobianos Chemother. 2004, 48: 1803-1806. 10.1128AAC.48.5.1803-1806.2004. Ver artigo PubMed PubMed Central Google Scholar OECD: Teste No. 407: Dose repetida Estudo de Toxicidade Oral de 28 dias em roedores. 2008, EUA: OECD Publishing View Article Google Scholar OECD: Teste No. 420: Toxicidade Oral Aguda - Procedimento de Dose Fixa. 2001, EUA: OECD Publishing Google Scholar Twaij H, Kery A, Al-Khazraji N: algumas investigações farmacológicas, toxicológicas e fitoquímicas sobre Centaurea phyllocephala. J Ethnopharmacol. 1983, 9: 299-314. 10.10160378-8741 (83) 90037-5. Ver artigo PubMed Google Scholar Peters W, Portus J, Robinson B: A quimioterapia da malária dos roedores, XXII. O valor das cepas resistentes aos fármacos de P. berghei no rastreio da actividade esquizonócida no sangue. Ann Trop Med Parasitol. 1975, 69: 155-171. Ver artigo PubMed Google Scholar Esume CO, Emudainohwo JOT, Opajobi AO, Osifo IM, Onyemekeih UR: Uma investigação sobre a propriedade anti-malária do extrato etanólico das folhas de gongronema latifolium em ratinhos albinos infectados com P. berghei sensíveis ao artesunato. Continental J Trop Med. 2011, 5: 10-14. Google Scholar Tona L, Mesia K, Ngimbi NP, Chrimwami B, Okond A, Cimanga K, de Bruyne T, Apers S, Hermans N, Totte J: atividade antimalárica in vivo de Cassia occidentalis. Morinda morindoides e Phyllanthus niruri. Annal Trop Med Parasitol. 2001, 95: 47-57. 10.108000034980020035915. Ver artigo Google Scholar Willcox M, Gamaniel S, Matsabisa M, Randriasamimanana J, Wambebe C, Rasoanaivo P: Diretrizes para a avaliação pré-clínica da segurança de antioxidantes tradicionais à base de plantas. Plantas Medicinais Tradicionais e Malária. 2004, EUA: CRC Press, Tradicional Fitoterapia para tempos modernos Google Scholar Yuan J, Cheng KC, Johnson RL, Huang R, Pattraradilokrat S, Liu A, Guha R, Fidock D, Inglese J, Wellems TE, Austin CP, Su X : Perfil genômico químico para terapias antimaláricas, assinaturas de resposta e alvos moleculares. Ciência. 2012, 333: 724-729. Ver artigo Google Scholar Pade V, Stavchansky S: ligação entre a solubilidade de absorção de fármaco e medições de permeabilidade em células Caco-2. J Pharm Sciences. 1998, 87: 1604-1607. 10.1021js980111k. Ver artigo Google Scholar Sunil Kumar MR, Kiran Aithal B, Udupa N, Sreenivasulu Reddy M, Raakesh V, Murthy RSR, Prudhvi Raju D, Satish Rao BS: Formulação de lipossomas pegilados circulantes longos carregados com plumbagina: avaliação in vivo em rolamento de ratos C57BL6 J Melanoma B16F1. Entrega de drogas. 2011, 18: 511-522. 10.310910717544.2011.595840. Ver artigo Google Scholar Hsieh Y-J, Lin L-C, Tsai T-H: Medição e estudo farmacocinético da plumbagina em um rato consciente livremente móvel usando espectrometria de massa de cromatografia líquida. J Chromatogr B. 2006, 844: 1-5. 10.1016j. jchromb.2006.06.024. Ver artigo Google Scholar Histórico de pré-publicação Sumsakul et al. Licenciado BioMed Central Ltd. 2014 Este artigo é publicado sob licença para a BioMed Central Ltd. Este é um artigo de acesso aberto distribuído nos termos da Creative Commons Attribution License (creativecommons. orglicensesby2.0), que permite o uso, distribuição e reprodução sem restrições Em qualquer meio, desde que o trabalho original seja devidamente citado. Quando colher a maconha Rambo 4 de novembro de 2012 15 Não é fácil ser paciente com o seu jardim quando esta é preenchida com enormes botões, mas saber como saber quando os brotos estão prontos para a colheita é De extrema importância. Se você colher antes que os botões alcancem a maturidade total, a potência e o rendimento de sua cultura não alcançarão seu potencial. Por outro lado, se você esperar muito tempo, a potência pode realmente diminuir. À medida que o botão se torna excessivo, o THCA começa a se degradar em CBL e CBN. À medida que os brotos crescem perto da maturidade total, uma camada visível dos tricomas começará a cobrir as flores e as folhas. Esses tricomas são glândulas de resina muito pequenas na superfície da planta que brilham ao sol como pequenos diamantes. Você provavelmente já ouviu isso como cristais. Algumas cepas de cannabis terão um desenvolvimento declarado de tricomas quatro ou cinco semanas antes do vencimento, outros desenvolverão até duas semanas antes de atingir a maturidade total. À medida que os brotos amadurecem, os cristais, ou a utilização de tricomas triturados, começam a inchar e se assemelham a pequenos cogumelos à medida que se enchem com canabinoides e terpenos. Sob ampliação de um loop de joalheria, as pontas bulbosas desses tricomas parecerão claras enquanto ainda se desenvolvem, mas começarão a ficar ambar ou lácteas à medida que elas alcancem e passam a maturidade total. Este leitoso ou âmbar é de cor é o que mostra que os canabinóides atingiram a maturidade total e começaram a se degradar. Quando cerca de 20 dos tricomas em um broto começam a ficar ambar ou a leite, esse é o momento de colher. Para ser claro, os tricomas não são os cabelos dos botões que se transformam de branco, rosa ou roxo a uma cor de ferrugem ou marrom. Esses cabelos são chamados de pistil e, apesar do que as pessoas podem dizer, sua cor não é um bom indicador de maturidade ou amadurecimento de brotos. Algumas plantas de cannabis podem atingir a maturidade total de uma só vez, enquanto outras plantas podem começar a amadurecer das colas superiores. Idealmente, você poderá colher a planta ao mesmo tempo, mas não é incomum para as colas superiores ou brotos externos amadurecer mais rápido. Você pode colher os botões maduros e deixar aqueles que não estão prontos por mais de uma semana ou mais. Muitas vezes, a luz extra proporcionada pela remoção dos botões maduros acelerará os outros muito rapidamente. O olho treinado pode identificar quando um broto está maduro sem ampliação. Considerando o quão importante é conseguir isso, sugiro um loop jeweler8217s até que você tenha a experiência no seu cinto.
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